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| 新型冠状病毒VSV假病毒的
构建及其感染能力的初步研究 |
| Preparation and infectivity evaluation of SARS-CoV-2 VSV-Based pseudovirus |
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| DOI：10.3969/j.issn.1007-8134.2022.02.004 |
| 中文关键词: 假病毒 血管紧张素转化酶II 新型冠状病毒 Wuhan-Hu-1株 D614G株 Delta株 S蛋白 细胞-细胞间感染 跨膜丝氨酸蛋白酶2 |
| 英文关键词: pseudovirus ACE2 SARS-CoV-2 Wuhan-Hu-1 strain D614G variant Delta variant spike protein cell-to-cell infection TMPRSS2 |
| 基金项目:国家自然科学基金（81971916） |
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| 中文摘要: |
| 摘要]?目的?在二级生物安全实验室条件下，通过构建新型冠状病毒（新冠病毒）VSV假病毒，研究新冠病毒及其流行变异株的侵入特性。方法?通过购买的新冠病毒（Wuhan-Hu-1株）VSV-luc假病毒构建VSV-G/VSV-ΔG-luc假病毒；利用VSV-G/VSV-ΔG-luc假病毒构建新冠病毒VSV假病毒。通过分子克隆对新冠病毒S基因相应位点进行突变，构建新冠病毒不同变异株的刺突蛋白表达质粒，由此包装出新冠病毒各种变异株假病毒。比较新冠病毒Wuhan-Hu-1株与D614G株、Delta株在不同细胞系中的感染能力。 结果?新冠病毒VSV假病毒构建成功。评价新型冠状病毒Wuhan-Hu-1株、D614G株、Delta株在4种不同细胞系中侵入情况，与Wuhan-Hu-1株相比，D614G株和Delta株的感染水平均明显增加（P均＜ 0.05），同时在Calu-3和Caco-2细胞系中，Delta株的感染水平明显强于D614G株（P均＜0.05）。利用模拟细胞-细胞间传播的感染试验发现，Delta株感染HEK-293T细胞与Vero细胞的能力明显高于D614G株（P均＜0.05）。 结论?新冠病毒Delta株的感染能力明显强于Wuhan-Hu-1株和D614G株。VSV假病毒系统能够模拟、替代新冠病毒活病毒在侵入细胞的过程中的生理功能，并且安全可靠、易于量化、应用广泛，在新冠病毒研究领域中能够发挥重要作用
摘要]?目的?在二级生物安全实验室条件下，通过构建新型冠状病毒（新冠病毒）VSV假病毒，研究新冠病毒及其流行变异株的侵入特性。方法?通过购买的新冠病毒（Wuhan-Hu-1株）VSV-luc假病毒构建VSV-G/VSV-ΔG-luc假病毒；利用VSV-G/VSV-ΔG-luc假病毒构建新冠病毒VSV假病毒。通过分子克隆对新冠病毒S基因相应位点进行突变，构建新冠病毒不同变异株的刺突蛋白表达质粒，由此包装出新冠病毒各种变异株假病毒。比较新冠病毒Wuhan-Hu-1株与D614G株、Delta株在不同细胞系中的感染能力。 结果?新冠病毒VSV假病毒构建成功。评价新型冠状病毒Wuhan-Hu-1株、D614G株、Delta株在4种不同细胞系中侵入情况，与Wuhan-Hu-1株相比，D614G株和Delta株的感染水平均明显增加（P均＜ 0.05），同时在Calu-3和Caco-2细胞系中，Delta株的感染水平明显强于D614G株（P均＜0.05）。利用模拟细胞-细胞间传播的感染试验发现，Delta株感染HEK-293T细胞与Vero细胞的能力明显高于D614G株（P均＜0.05）。 结论?新冠病毒Delta株的感染能力明显强于Wuhan-Hu-1株和D614G株。VSV假病毒系统能够模拟、替代新冠病毒活病毒在侵入细胞的过程中的生理功能，并且安全可靠、易于量化、应用广泛，在新冠病毒研究领域中能够发挥重要作用 |
| 英文摘要: |
| [Abstract]?Objective? In BSL-2 laboratory, the SARS-CoV-2 VSV-based pseudovirus is developed to study the entry process of the SARS-CoV-2. Methods?VSV-G/VSV-ΔG-lucpseudoviruswas established from the commercial SARS-CoV-2 (Wuhan-Hu-1) VSV-based pseudovirus; VSV-G/VSV-ΔG-lucpseudoviruswas used to construct more SARS-CoV-2 VSV-based pseudovirus; The plasmid containing spike (S) gene of SARS-CoV-2 variants of concern (VOC) was constructed by using PCR-directed mutagenesis, and thepseudoviruses of SARS-CoV-2 VOC were packaged；The infectivity of Wuhan-Hu-1 strain with D614G variant and Delta variant in different cell lines was compared. Results?The VSV-based SARS-CoV-2 pseudovirus was successfully constructed. We compared the entry efficacy among SARS-CoV-2 Wuhan-Hu-1 strain, D614G variant and Delta variant in 4 different cell lines. Compared with Wuhan-Hu-1 strain, the infection of D614G variant and Delta variant in the four cell lines were significantly increased (P＜ 0.05). Meanwhile, in Calu-3 and Caco-2 cell lines, the infection of Delta variant was significantly enhanced compared to the D614G variant (P ＜ 0.05) The ability of Delta variant to infect HEK-293T cells and Vero cells was significantly higher than that of D614G variant (P ＜ 0.05) in Spike-mediated cell.-to-cell infection. Conclusions?The infectivity of SARS-CoV-2 Delta variant is significantly stronger than Wuhan-Hu-1 strain and D614G variant. The VSV-based pseudovirus is a secured, reliable, and practicable system that can mimic the physiological functions of live SARS-CoV-2 virus in the process of entry, which may play an important role in the research of SARS-CoV-2. |
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